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逆转录酶 M-MLV Reverse Transcriptase(RNase H^-)产品简介

莫洛尼氏鼠病毒逆转录酶（M-MLV RT）能以单链RNA或DNA为模板，在引物的引发下合成与模板互补的DNA链。本逆转录酶是通过基因重组技术克隆表达的缺失突变型RNase H-的M-MLV反转录酶，RNase H活性缺失，延伸能力强，可用于较长的cDNA合成以及高比例的全长cDNA文库的构建等。

来源

重组蛋白质（E.coli）；纯度>95%，没有检测到其他蛋白酶和核酸酶活力。

活力单位定义

以Poly (A)为模板，Oligo (dT)为引物，在37℃条件下，10分钟内催化掺入1 nmol dTTP所需酶量定义为1个活性单位(U)。

应用

用于 lst-Strand cDNA 的合成， RT-PCR 反应以及 Real Time RT-PCR 反应等。

储存条件

冰袋运输；长期保存-20℃或以下（12个月）； 避免反复冻融，建议分装保存5× M-MLV RT Buffer。

溶液成分

M-MLV RT (RNase H-) 储存液	5X M-MLV RT Buffer
20 mM Tris-HCl，pH 7.5	250 mM Tris-HCl，pH 8.3
100 mM NaCl	250 mM KCl
1 mM EDTA	20 mM MgCl
5 mM DTT	50 mM DTT
0.1%(v/v) TritonX-100
50%（V / V）Glycerin

使用示例 在微量离心管中，配制下列模板RNA/引物混合液：

Template RNA	Total RNA	1ng-5μg
	poly(A) RNA	10pg-500ng
Primer	Oligo(dT)18 Primer	0.5μg(100pmol)
	Random Primers	0.2μg(100pmol)
	Specific Primer	10-20pmol
DEPC-treated water		Up to 12.5μl

65℃保温5分钟后迅速在冰上冷却2分钟； 短暂离心后，加入以下组分：

5X M-MLV RT Buffer	4μl
dNTP(10mM)	2μl
M-MLV RT (RNase H-)(200U/μL)	1μl
RNase Inhibitor	0.5μl
Total volume	20μl

42℃孵育1小时；
以Random Primers作为反转录引物时应先于25℃，反应10分钟，然后再于42℃条件孵育1小时。 70℃加热15分钟以终止反应。得到cDNA溶液可直接用于2nd-Strand cDNA的合成或PCR扩增。